劉儀偉帶領(lǐng)吃貨挺進(jìn)大別山 茯苓不同產(chǎn)地含量評(píng)測(cè)

【天地網(wǎng)訊】

　　金秋十月，無(wú)限極舉辦的2016“道地原料溯源之旅”啟程。著名主持、國(guó)民美食家劉儀偉率養(yǎng)生文化愛好者、中醫(yī)藥行業(yè)專家等代表組成的百人“溯源之旅”探秘團(tuán)，挺進(jìn)大別山，踏上安徽岳西這片種植茯苓的優(yōu)質(zhì)地段，親手采挖、辨識(shí)茯苓，品嘗茯苓養(yǎng)生美食……親身探尋道地茯苓產(chǎn)地的多重樂趣。不過，茯苓產(chǎn)地絕不局限于安徽岳西一地，茯苓產(chǎn)地分布較廣，不同產(chǎn)地的茯苓各種成分有何差異?且聽下面分解。

　　茯苓為多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf 的干燥菌核，根據(jù)臨床用藥及加工商品規(guī)格，茯苓可分為四種不同的藥用部位。依據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論及茯苓的傳統(tǒng)加工方法，將新鮮茯苓個(gè)經(jīng)發(fā)汗或冷凍后削下的黑色外皮稱“茯苓皮”，利水消腫功效最佳;茯苓皮層以下的帶色部分，削下切片干燥即為“赤茯苓”，長(zhǎng)于滲利濕熱;菌核內(nèi)部白色部分切薄片或小方塊、丁，即為“白茯苓”，擅長(zhǎng)健脾益氣;茯苓藥材中帶有松根的部分，即為“茯神”，茯神寧心安神功效最強(qiáng)。茯苓藥材中化學(xué)成分主要包括多糖和茯苓酸，本文就根據(jù)不同產(chǎn)地分析這兩種含量。

　　不同產(chǎn)地茯苓多糖含量評(píng)測(cè)

　　茯苓中β-茯苓聚糖占茯苓藥材重量的90%以上。茯苓聚糖是一種水不溶性多糖，水解以后生成茯苓多糖及其衍生物才具有調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤等藥理活性，水溶性多糖少于0.3%，因此，茯苓多糖含量測(cè)定主要是測(cè)定β- 茯苓聚糖的含量。

　　目前，茯苓加工以手工為主，加工工藝較為落后，茯苓藥材質(zhì)量差別很大，加工的商品規(guī)格有幾十種，沒有統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。茯苓皮臨床用量不大，沒有得到大量的綜合開發(fā)利用，大部分作為廢料處理，造成極大浪費(fèi)。本研究采用紫外分光光度法，對(duì)茯苓不同產(chǎn)地、茯苓藥用部位多糖含量進(jìn)行比較，從而為茯苓藥材質(zhì)量和商品規(guī)格等級(jí)制訂提供科學(xué)依據(jù)。

　　分別取不同量已知含量的茯苓藥材粉末(過80 目篩)6 份，精密稱定，置圓底燒瓶中，分別用150mL 80%乙醇回流提取1h，趁熱過濾，殘?jiān)?0%的熱乙醇洗滌2次，每次10mL，將殘?jiān)盀V紙置燒瓶中，分別精密加入不同量的葡萄糖對(duì)照品，精密加入1mol·L^-1 NaOH 溶液150mL，瓶用熱水洗滌2次，每次10mL，合并濾液與洗液，放冷，加水至刻度，搖勻，即得。

　　分別精密吸取供試液0.5mL 于25mL具塞試管中，加水至2.5mL，加入5.0%苯酚水溶液6.0mL，在冰水浴中緩緩加入濃硫酸至刻度，搖勻，放冷后置沸水浴中10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10min，取出，放置至室溫，隨行溶劑空白，測(cè)定吸收度。結(jié)果見表1。

表1 樣品回收率試驗(yàn)結(jié)果

　　樣品含量測(cè)定分別取不同產(chǎn)地茯苓不同部位藥材粉末(過80目篩)約0.1g，精密稱定，按方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試液0.5mL 于25mL具塞試管中，加水至2.5mL，加入5.0%苯酚水溶液6.0mL，在冰水浴中緩緩加入濃硫酸至刻度，搖勻，放冷后置沸水浴中10min，取出，立即置冰水浴中冷卻10min，取出，放置至室溫，隨行溶劑空白，測(cè)定吸收度。結(jié)果見表2。

表2 多糖含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）

　　同藥用部位，通過對(duì)比全國(guó)八個(gè)主要茯苓產(chǎn)區(qū)茯苓不同藥用部位堿溶性多糖含量測(cè)定結(jié)果，發(fā)現(xiàn)絕大部分產(chǎn)地茯苓藥材，白茯苓堿溶性多糖含量均在75%以上，赤茯苓、茯苓皮堿溶性多糖變化較大，茯苓皮堿溶性多糖含量在45%以上，僅比赤茯苓的堿溶性多糖含量低一些，當(dāng)作廢品丟棄可惜，應(yīng)該綜合考慮。

　　浸提溶劑的考察稱定2.00g合歡花粉末兩份，分別用40mL的水和60%乙醇做溶劑，于70 ℃水浴上加熱回流2h，浸提2次，合并濾液，制成供試品溶液，按操作，計(jì)算黃酮得率。結(jié)果顯示水提法黃酮平均得率為0.13% (n=3)，遠(yuǎn)低于醇提法，并且水提法得到的樣品溶液較為渾濁，影響測(cè)定結(jié)果。故而選擇醇提法作為浸提黃酮的方法。

　　浸提次數(shù)的考察稱取合歡花粉末2.00g三份分別置于燒瓶中，加入40m 的60%乙醇，于70 ℃的水浴上回流2 h，分別浸提1次、2次、3次，浸提液抽濾，合并濾液，制成供試品溶液，按操作，計(jì)算黃酮得率結(jié)果顯示黃酮得率分別為1.59% 、2.31% 、2.38% (n=3)。黃酮得率隨著浸提次數(shù)的增加而增大，但第二次浸提和第三次浸提差別不大，說明合歡花經(jīng)過2次浸提，其所含的黃酮大部分被提出來了，若再提1次，黃酮得率僅稍稍提高，而溶劑消耗增加，增加了過濾濃縮等后續(xù)工作量，使成本升高，故合歡花黃酮浸提兩次比較適宜。

　　安徽省大別山所產(chǎn)茯苓藥材白茯苓堿溶性多糖含量較其他產(chǎn)地高，同省不同產(chǎn)地白茯苓堿溶性多糖含量有明顯差異，說明茯苓藥材中白茯苓堿溶性多糖含量區(qū)域性較強(qiáng)，主要原因是安徽省大別山為白色砂性土，土壤含砂很大;所產(chǎn)茯苓質(zhì)地潔白、致密、純凈，不易浸染、腐爛、串色，顏色越深，質(zhì)地越松泡，腐爛、浸染，茯苓藥材中堿溶性多糖含量越低。茯苓不同藥用部位茯苓多糖含量比較，結(jié)果顯示白茯苓> 赤茯苓> 茯苓皮，并發(fā)現(xiàn)茯苓顏色越深，質(zhì)地越松泡，腐爛、浸染，茯苓藥材中堿溶性多糖含量越低，這為臨床用藥和茯苓加工商品規(guī)格制訂和加工方法提供了科學(xué)依據(jù)。

　　茯神采樣困難，筆者只收集到湖南和安徽的茯神，通過研究，結(jié)果顯示茯神多糖含量低于白茯苓，略高于赤茯苓(數(shù)據(jù)略)，推測(cè)認(rèn)為茯神中白茯苓所占比例相對(duì)較少，赤茯苓和茯神木占有一定的比例，有很少一部分出現(xiàn)浸染、腐爛、串色。分別采用冷浸提取法、溫浸提取法、超聲提取法、回流提取法進(jìn)行比較，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，冷浸提取法>超聲提取法> 溫浸提取法> 回流提取法，溫度對(duì)茯苓多糖提取有較大的影響，低溫能有效增加茯苓多糖提取率，堿性條件下高溫對(duì)茯苓多糖有破壞作用，一部分多糖變成了小分子化合物，不能與苯酚- 硫酸溶液顯色，因此本試驗(yàn)采用低溫冷浸法提取茯苓多糖。

　　通過對(duì)比苯酚- 硫酸法和蒽酮- 硫酸法，發(fā)現(xiàn)采用蒽酮- 硫酸法，加熱時(shí)間對(duì)最大吸收峰有較大影響，穩(wěn)定性差，這與參考文獻(xiàn)結(jié)論一致。苯酚- 硫酸法利用多糖類成分在硫酸作用下，先水解成單糖，并迅速脫水生成糖醛衍生物，然后和苯酚溶合成有色的化合物，且顏色穩(wěn)定，此溶液在適當(dāng)波長(zhǎng)(489nm)有特征吸收，作為測(cè)定茯苓多糖含量的方法，結(jié)果準(zhǔn)確，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性好。

　　綜上所述，采用苯酚- 硫酸法測(cè)定茯苓不同產(chǎn)地、不同藥用部位多糖含量，方法穩(wěn)定可行，可用于茯苓藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)。由于茯苓不同藥用部位成分含量存在差異，并與臨床療效密切相關(guān)。因此，規(guī)范茯苓不同藥用部位和加工方法，制定茯苓藥材加工商品等級(jí)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并與三萜類成分含量、水溶性浸出物、醇溶性浸出物一起，共同準(zhǔn)確評(píng)價(jià)茯苓藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣，建立茯苓藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)具有重要意義。

　　不同產(chǎn)地茯苓酸含量差異評(píng)測(cè)

　　中茯苓酸是其主要有效成分之一。2015年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)未收載茯苓的含量測(cè)定項(xiàng)。本試驗(yàn)采用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)對(duì)茯苓中茯苓酸進(jìn)行了含量分析,建立了簡(jiǎn)便快捷、準(zhǔn)確可靠的含量測(cè)定方法,進(jìn)一步完善了茯苓藥材的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

　　茯苓藥材由本課題組分別采自湖南、河南、四川、浙江、貴州、安徽、湖北、廣州、福建9個(gè)地區(qū),共9批。

　　精密稱取茯苓粗粉(過60目篩)約1.0g,置于50 mL 具塞錐型瓶中,加甲醇30 mL,加塞稱定,浸泡30 min,超聲90 min,途中及結(jié)束時(shí)用甲醇補(bǔ)足減失的重量,冷卻,過濾;用甲醇洗滌濾渣,洗液合并于濾液中,置蒸發(fā)皿中水浴蒸干,殘留物用甲醇定容至10mL 容量瓶中,即得。

　　精密稱取已知含量的樣品0.5g,共6份,分別加入一定量的茯苓酸對(duì)照品，按下方法制備并測(cè)定量,RSD=1.85%(n =6),結(jié)果見表3。

表3 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

　　取不同產(chǎn)地茯苓粗粉,按方法制備供試品溶液,用0.45μm 微孔濾膜過濾,濾液密封備用。分別精密吸取各供試品溶液10μL,注入液相色譜儀,按上述色譜條件測(cè)定,并計(jì)算樣品溶液中茯苓酸的含量。結(jié)果顯示,四川西昌和湖北羅田產(chǎn)茯苓中茯苓酸的含量明顯高于其他產(chǎn)地,結(jié)果見表4。

表4 各產(chǎn)地茯苓中茯苓酸的含量測(cè)定結(jié)果

　　經(jīng)反復(fù)試驗(yàn),建立了茯苓藥材主要有效成分茯苓酸的含量測(cè)定方法,該方法重復(fù)性好,可靠性強(qiáng),完善了2015 年版《中華人民共和國(guó)藥典》(一部)収載茯苓藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),為再版藥典補(bǔ)充茯苓藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)“含量測(cè)定”內(nèi)容提供了依據(jù)。這對(duì)于進(jìn)一步有效控制茯苓藥材的質(zhì)量具有重要意義。9個(gè)產(chǎn)地所產(chǎn)茯苓中茯苓酸的含量測(cè)定表明,不同產(chǎn)地茯苓中茯苓酸含量有較大差異,四川西昌和湖北羅田產(chǎn)茯苓中茯苓酸的含量明顯高于其他產(chǎn)地,表明其質(zhì)量品質(zhì)較優(yōu)。這可能與繁殖菌種和生態(tài)環(huán)境有關(guān),值得進(jìn)一步深入研究。

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