現(xiàn)代藥材鑒別技術

中藥顯微鑒別技術_取樣、制片、染色

中藥的顯微鑒定法是利用顯微技術對中藥進行顯微分析，以確定其品種和質量的一種鑒定方法。顯微鑒定主要包括組織鑒定和粉末鑒定，利用顯微鏡來觀察藥材的組織構造、細胞形狀及內含物的特征、礦物的光學特性，和用顯微化學方法，確定細胞壁及細胞內含物的性質或某些品種有效成分在組織中的分布等，用以鑒別藥材的真?zhèn)闻c純度甚至品質。

一、取樣

取樣的代表性直接影響到結果的判斷準確，因此必須重視取樣的各個環(huán)節(jié)。

（一）對照品

對照品粉末是檢定供試品的參照物，其制備是顯微鑒別的先決條件。有經(jīng)驗者，可自取標本，鑒定后制作，或購買藥材經(jīng)品種基原鑒定。還應注意有些藥材的顯微特征受生長年限及環(huán)境的影響，會產(chǎn)生一定的波動，所以對于供試品的產(chǎn)地、采收期、加工方法等也應當認真記錄。

（二）供試品

中藥材  原藥材應注意基原、產(chǎn)地、規(guī)格的完整性、清潔程度以及有無水跡、霉變或其他物質污染等情況，并詳細記錄。

（1）從同批藥材包件中抽取有代表性的檢定用樣品。

（2）對破碎的、粉末狀的或大小在 1cm 以下的藥材，一般藥材 100g-500g；粉末狀藥材25g；貴重藥材5g-10g；個體大的藥材，根據(jù)實際情況抽取代表性的樣品。

（3）將所取有代表性樣品混合均勻，即為總樣品量。

（4）前處理：將供試品撿凈后，用量較小時，可以用乳體或小型電磨粉碎過《中國藥典》6號篩（1.0μm-250μm）備用。

1、中成藥

（1）取樣：從各批號的箱、包、瓶中隨機取樣，記錄好廠家、批號，從各包裝盒中任意取1丸，每批號不得少于3次。各供試品留樣保存，保存期限至少1年。

水丸無包衣時，可直接取2 丸-3 丸，乳缽中研成細粉后，取少量置裁玻片上，滴加規(guī)定的試液，攪拌均勻，使粘結的細胞、組織分離，再按粉末特征加水合氯醛試液或其他適當試液處理后觀察。

水蜜丸或大蜜丸；可直接用刀片橫向切開取一薄片，或用小鋼鏟取一小塊（約15mg）放置在載玻片上制片觀察。

（1）去包衣：中藥片劑常見包衣為糖衣，隔離層常使用膠漿、糖漿和滑石粉。水丸和糊丸等（掛）衣的材料有滑石、蔗糖、朱砂、雄黃、青黛、百草霜、礞石、赫石等?？捎玫镀瑢聞內?，簡單的辦法也可將片劑或丸劑斷為兩半，直接取內心，粉碎進行觀察。

（2）添加劑：為便于觀察，可對中成藥的制造過程中使用的添加劑做適當?shù)那疤幚怼?/p>

除去水溶性干擾物：將檢品置于蒸餾水中研勻，離心處理，取沉淀物檢查。

除去脂溶性干擾物：將檢品滴加適量氯仿，離心處理，取沉淀揮干氯仿后檢查。

除去淀粉，糊化淀粉的干擾：將檢品滴加蒸餾水研勻，置燒杯中煮沸、冷卻，離心處理，取沉淀檢查。

以上操作中，為防止某些顯微特征的流失，應進行留樣觀察。

二、制片

（一）制片

1、載玻片與蓋玻片  載玻片與蓋玻片是影響圖像質量的因素之一。因載物臺下的聚光器是按使用一定厚度的載玻片設計的。首先應選擇規(guī)格統(tǒng)一的載玻片（厚0.9mm-1.2mm）與蓋玻片（厚0.12mm-0.17mm）。使用前，將載玻片與蓋玻片用無水乙醇浸泡后，用柔軟的綢布或無纖維人造紙揩擦，至表面潔凈無暇。

2、制片  將供顯微觀察的粉末藥材或樣品置于載玻片上，然后加入適宜的試液1滴，用玻璃棒攪勻，用鑷子將蓋玻片沿一側輕輕放下，使液體自然展勻即可?？捎脼V紙吸拭溢出的液體或從蓋玻片邊緣補充液體不足的空隙。

（二）制片按使用試劑分類

1、稀碘液制片  主要用于觀察含淀粉粒。

2、斯氏試液制片  試液由醋酸：甘油：水（1：1：1）組成。用于觀察包括淀粉粒在內的所有顯微鑒別特征。

3、水合氯醛制片  水合氯醛試液能滲透組織，使皺縮的細胞膨脹并能溶解淀粉粒、蛋白質、樹脂、揮發(fā)油和葉綠素等，使細胞組織變得透明而清晰。

4、乙醇裝片  在觀察的切片中有菊糖、粘液、樹膠等時，使用95%以上的乙醇。

（三）制片按保存時間分類

1、臨時制片  封藏介質一般為流動性液體，不耐久藏。但制作簡易、適用于一般的顯微觀察及顯微化學反應。

2、半永久性制片  在上述臨時制片周圍，直接使用加拿大樹膠，將蓋玻片周圍封嚴，室溫放置 1 天干燥后，置冰箱內，一般可供 10 年以上觀察使用。封藏介質還可以選用半固體的甘油明膠。

3、永久性制片  封藏介質一般呈固態(tài)，可長期保存，但制作費時，多用于教學標本。制作方法一般是先將粉末用無水乙醇浸潤，隨后瀝去乙醇，用二甲苯浸潤，再瀝去二甲苯，滴加加拿大樹膠的二甲苯溶液后，自然揮發(fā)干燥固定后即可。

三、染色

為使標本片特征顯著，可根據(jù)細胞壁及細胞內含物的性質，加入不同染色劑染色。常見的顯微化學反應如下（所有試液的配制方法參見《中國藥典》）。

（一）細胞壁性質的檢定

1、木化細胞壁，加間苯三酚試液1 滴-2 滴，稍放置，加鹽酸 1 滴，因木化程序不同，顯粉色、紅色或紫紅色。此操作最好在水合氯醛透化后再進行，其效果較好。

2、木栓化或角質化細胞壁，加蘇丹III 試液，稍放置或微熱，呈橘紅色至紅色。

3、纖維素細胞壁  加氯化鋅碘試液，或先加碘試液濕潤后，稍放置，再加硫酸溶液（33-50）顯藍色或紫色。

（二）細胞內含物性質的檢定

1、淀粉粒  加稀碘試液，呈藍色或紫色。

2、糊粉粒  （1）加碘試液，呈黃棕色。（2）加硝酸汞試液，呈磚紅色（材

料中如含有多量脂肪油，宜先用乙醚或石油醚脫脂后進行）。

3、脂肪油、揮發(fā)油和樹脂（1）加蘇丹 III 試液，呈橘紅色，紅色或紫紅色。（2）加90%乙醇、脂肪油和樹脂不溶解（蓖麻油及巴豆油例外），揮發(fā)油則溶解。

4、菊糖  加10%α-萘酚乙醇溶液，再加80%硫酸1滴-2滴，顯紫紅色并很快溶解。

5、粘液  加釕紅試液，呈紅色。

6、草酸鈣結晶  （1）加稀醋酸不溶解，加稀鹽酸即溶解但無氣泡發(fā)生。（2）加硫酸（1-2）逐漸溶解。片刻后析出針狀硫酸鈣結晶。

7、碳酸鈣（鐘乳體），加稀鹽酸溶解，同時有氣泡發(fā)生。

8、硅質  加硫酸不溶解。

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